Imobilisasi antibodi T₄ pada tabung polipropilen secara kimia dengan glutaraldehid

Pemisahan fraksi antigen bebas dari fraksi terikat merupakan tahap yang penting dalam penentuan radio immunoassay.Pengembangan teknik pemisahan menggunakan antibodi fase padat, sangat disukai pemakai RIA karena memudahkan pengerjaan di laboratorium sehingga terasa lebih praktis dan sederhana. Pada penelitian ini dilakukan teknik pemisah fase padat dongan mengikat antibodi T₄ secara kimia pada tabung plastik polipropilen yang sebelumnya dilapisi glutaraldehid. Antibodi yang akan ditempelkan terlebih dahulu dimurnikan secara kromatografi afinitas menggunakan protein-A-sepharosa.Hasil percobaan menunjukkan bahwa kondisi pelapisan tabung optimal diperoleh dengan menggunakan larutan glutaraldehid 2,5%, pH 9-9,5 yang diinkubasikan pada tabung selama 72 jam pada suhu 37°C. Kadar antibodi T₄ yang digunakan 15 µg/ml diinkubasikan pada pH 8-8,5 selama 72 jam pada suhu 25°C. Untuk memperoleh daerah kerja yang diinginkan, ditentukan volume pereaksi dan waktu inkubasi optimal. Data percobaan menunjukkan bahwa disain penentuan dengan menambahkan 20 µl larutan baku T₄. 300 µl T₄ bertanda ¹²⁵I pada tabung yang telah dilapisi dengan antibodi dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 25°C dapat memberikan hasil yang cukup baik pada daerah kerja 14-780 nmol/1. Evaluasi lebih lanjut dari hasil kinerja penentuan menunjukkan bahwa RIA- T₄ dengan metode tabung berlapis sebanding dengan kit RIA- T₄ cara magnetik produksi Amer- sham. Uji kestabilan berdasarkan harga-harga ikatan maksimum dan ikatan non spesifik, menunjukkan hasil yang masih cukup baik hingga lima bulan penyimpanan.