PENANDAAN DAN UJI KUALITAS SENYAWA PROGESTERON -11-alpha-­HIDROKSI HEMISUKSINAT I-125

Sari

PENANDAAN DAN UJI KUALITAS PROGESTERON-11-α-HIDROKSI HEMISUKSINAT ¹²⁵I. Progesteron adalah hormon steroid yang disekresi oleh korpus luteum dan korteks adrenalin dari kelenjar hipofisa. Hormon tersebut dapat digunakan untuk memonitor kehamilan atau menentukan kesuburan pada wanita atau hewan. Penandaan hormon Progesteron dengan ¹²⁵I dilakukan untuk pembuatan "tracer" pada Kit Progesteron-¹²⁵I untuk menentukan kadar Progesteron dalam darah atau susu pada hewan. Percobaan iodinasi progesteron menggunakan derivatnya progesteron-11-α-hidroksi hemisuksinat telah dilakukan. Penandaan dilakukan secara bertahap. Pertama dilakukan aktifasi derivat progesteron menggunakan N-metil morfolin dan isobutil kloroformat, berikutnya iodinasi histamin menggunakan oksidator kloramin T dan terakhir konjugasi histamin bertanda ¹²⁵I pada derivat progesteron yang sudah diaktivasi. Hasil penandaan dimurnikan dengan HPLC. Kemurnian radiokimianya ditentukan dengan elektroforesa. Imunoreaktifitasnya ditentukan dengan menentukan ikatan maksimum dan nilai "non specific binding"(NSB). Hasil penandaan progesteron-11-α-hidroksi hemisuksinat dengan rendemen 22.15% , kemurnian radiokimia 92.30% dan radioimunoreaktifitas dengan ikatan maksimum 51% ( untuk standar 0) serta NSB 0.67% (kurang dari 1%). Aktifitas jenis yang diperoleh 7.72 Ci/g. Validasi "tracer" dilakukan dengan menentukan 3 sera kontrol (QC sera) progesteron untuk nilai QC sera rendah (L) 2.72 ± 0,49 nmol/L ( 1.2 - 2.5 nmol/L), sedang (M) 11.33 ± 1,15 nmol/L (6 - 15 nmol/L) dan tinggi (H) 15.95 ± 5.32 nmol/L (10 - 23 nmol/L)(Tabel 1.). Dari penentuan sensitifitas "assays" memberikan nilai (0.70 ± 0.024) nmol/L.

LABELLING AND VALIDATION OF PROGESTERONE-11-α-HIDROXY HEMISUCCINATE (¹²⁵I). Progesterone is a steroid hormone secreted by the corpus luteum and the adrenal cortex in the hypophise gland. The hormone can be used for monitoring pregnancy and even more for the assessment of the corpus luteum in fertile woman (4). The labelling of progesterone with ¹²⁵I was carried out for tracer production in the preparation of Progesterone Kit used in the determination of the progesteron in serum and cattle milk. Iodination of progesterone-11-α-hidroxy hemisuccinate as a progesterone derivate has been done. The labelling was carried out in two steps reaction. First the progesterone derivate was activeted using N- methyl morpholine and isobutylchloroformate. The second step was performed by conjugating the labelled ¹²⁵I Histamin to the activated progesterone derivate. The labelled compound was purified with HPLC followed with the determination of the chemical purity using electrophoresis, the immunoreactivity controlled with the maximum binding of the zero standard and the non specific binding using the Progesterone Kit. Experimental results showed that the iodination of Progesterone-11-α-hidroxy hemisuccinate (¹²⁵I) yield 22.15%, chemical purity 92.30 %, the radioimmunoreactivity 51% as maximum binding (for zero standard), with NSB 0.67%, and the specific activity obtained 7.72 Ci/g. Validation of the tracer using controls (low, medium and high) shows the results as follows : (2.72 ± 0.49) nmol/L for low standard and control (1.2 - 2.5 nmol/L), (11.33 ± 1.15) nmol/L for medium standard and control (6 - 15 nmol) and (15.95 ± 5.32) nmol/L for high standard and control (10 - 23 nmol/L). The sensitivity of the assay was (0.70 ± 0.024 nmol/L) for zero standard.